中国口腔颌面外科杂志 ›› 2007, Vol. 5 ›› Issue (1): 50-55.

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rhBMP-2诱导成肌细胞表达成骨表型的研究

曾融生,束煌 ,王剑宁   

  • 出版日期:2007-02-10 发布日期:2007-02-10

  • Online:2007-02-10 Published:2007-02-10

摘要: 目的:检测不同浓度rhBMP-2对诱导成肌细胞成骨表型表达的影响,探索诱导成肌细胞表达成骨表型的rhBMP-2的最适浓度。方法: 采用双重酶消化法获取SD大鼠乳鼠的成肌细胞,纯化后,在含15%胎牛血清的DMEM培养液中培养。取第3代培养细胞,按培养液中不同rhBMP-2浓度分组,分为0、0.1、0.5、1.0、1.5和5.0μg/ml共6组( 0μg/ml组为对照组),培养1、2和4周。收集不同时期细胞培养上清液和细胞爬片进行检测,检测指标为:细胞形态和数量、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(OCN)含量、Ⅰ型胶原合成量和钙化结节染色。采用SPSS10.0统计软件包进行统计分析。各组间比较采用方差分析(ANOVA)。结果:应用rhBMP-2后,梭形成肌细胞减少,圆形或多突形成肌细胞明显增加,细胞呈集结性生长,培养4周可形成不透光结节。低、中浓度(0.1~1.5μg/ml)rhBMP-2组细胞数量和对照组之间无显著性差异(P>0.05),但高浓度(5.0μg/ml)rhBMP-2组细胞数量显著下降(P<0.05)。0.1~1.5μg/ml 4组rhBMP-2均能促进成肌细胞合成分泌ALP、OCN和Ⅰ型胶原(所有组与对照组比较,P<0.05),其中0.5和1.0μg/ml 2组促进作用更显著。 细胞培养4周后,茜素红S染色法示结节呈红色钙阳性反应。结论:低、中浓度(0.1~1.5μg/ml)rhBMP-2对成肌细胞增殖无显著影响,但高浓度(5.0μg/ml)rhBMP-2可显著抑制成肌细胞增殖。rhBMP-2可有效诱导成肌细胞表达成骨细胞各项表型并能体外成骨,其中0.5~1.0μg/ml是一个较为适宜的诱导浓度。